A ocupação humana moldou costumes próprios ao longo do tempo. A criação de gado existe na região há mais de 200 anos, fazendo com que o homem pantaneiro desenvolvesse práticas específicas para lidar com o ambiente, incluindo a lida do gado, o manejo da canoagem, a pesca e a caça.
Nas comitivas de gado, a moda de viola se consolidou como um dos estilos musicais mais ouvidos e tocados. O uso do berrante permanece ativo no cotidiano tropeiro, além de marcar presença nas festas e manifestações culturais.
Para o transporte fluvial pelos rios da bacia, a chalana é considerada o meio de transporte oficial da região. Em cidades de apoio como Corumbá, com hospedagens às margens dos cursos d'água — caso do Candeias Gold Fish, situado em frente ao Rio Paraguai —, o trânsito de embarcações faz parte da rotina local.